Microscopía

CAPÍTULO 5
EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO.

5.6.-Microfotografía electrónica: Interpretación de las imágenes

Al observar y estudiar las microfotografías electrónicas se debe ser muy cuidadoso en la interpretación de las imágenes de la ultraestructura celular. Muchas interrogantes han persistido en la mente de los microscopistas, quienes han tratado de explicar y buscar respuestas a ellas. Durante muchos años se ha planteado la duda si en realidad lo que se observa en las micrografías electrónicas de transmisión corresponde a la realidad, o si por el contrario, es el aspecto de los elementos celulares modificados por las sustancias y métodos empleados en el procesamiento del tejido (artificios de técnica); o debidos a la muerte celular y sus efectos en el citoplasma, notablemente en los lisosomas. Estas dudas sobre los artificios de técnica han podido disiparse (en parte) mediante el uso de controles negativos y al comparar entre sí las micrografías de microscopía de luz, electrónica de transmisión y de barrido. Con el empleo de técnicas más recientes como inmunofluorescencia y microscopía confocal muchas estructuras presentes en la célula han sido estudiadas, corroborando su aspecto morfológico observado previamente en las micrografías electrónicas.
El contraste observado en las microfotografías electrónicas de transmisión depende de ciertas propiedades del espécimen, del sistema óptico del microscopio y de las condiciones de iluminación y reproducción fotográfica.
Las regiones del espécimen que contienen metales pesados empleados en la obtención del preparado, aparecen como regiones oscuras (electron-densas) debido al poder que poseen los átomos del metal pesado en dispersar los electrones que inciden sobre la muestra. Las regiones del espécimen (por ejemplo cristales) que poseen una mayor densidad aparecerán más oscuras que las regiones vecinas amorfas (fig. 5-10). A mayor cantidad de metal depositado, mayor electrondensidad, lo cual permite un marcado contraste, el cual es revelado en una amplia gama que va desde el negro, pasando por los tonos de gris hasta llegar al blanco; esto último representa las zonas en las que no se depositó el metal. Variaciones en el espesor del espécimen afectan la interpretación debido a la superposición de elementos; a mayor espesor, mayor contraste, de allí que el espesor del corte debe ser mínimo (alrededor de 100 nanómetros). Los cortes son colocados en una rejilla (portaobjeto) de cobre revestida de una película plástica y este material puede incrementar la granulosidad en la imagen y puede interferir seriamente con el contraste de la microfotografía (14).
Las microfotografías electrónicas de barrido muestran una imagen 3D (tridimensional) del espécimen analizado. En la micrografía las zonas más oscuras corresponden a los planos más profundos y las zonas más claras a los planos más superficiales del espécimen, a partir de los cuales se originó una mayor cantidad de electrones secundarios. Al componerse la imagen de zonas claras y oscuras se puede apreciar el relieve y las depresiones, que en conjunto, conformarán el aspecto tridimensional (fig. 5-11).

Figura 5-10.- Microfotografía electrónica de una mitocondria al Microscopio electrónico de transmisión. Las zonas más oscuras son denominadas electron-densas y las zonas claras son denominadas electron-lúcidas. Nótese la variada electrondensidad, la cual depende del grado de afinidad de las estructuras por los metales empleados para el contraste. Aumento 60.000x. Tomada de Raisman, J., González A. Hipertextos en el área de biología. Microscopía electrónica (94).

Figura 5-11.- Microfotografía electrónica de un glomérulo renal al Microscopio electrónico de barrido. La imagen obtenida se observa en tres dimensiones, donde la profundidad de campo permite visualizar los diversos relieves. Aumento 1.200x. Tomada de Raisman, J., González A. Hipertextos en el área de biología. Microscopía electrónica (94).

5.7.-Semejanzas y diferencias entre la microscopía electrónica y la microscopia de luz


Inicio Introducción Capítulo 1: Limitaciones para el estudio de células y tejidos Capítulo 2: Nociones básicas de óptica Capítulo 3: La imagen. Sistemas ópticos Capítulo 4: El microscopio compuesto Capítulo 5: El microscopio electrónico Capítulo 6: Técnicas especiales de microscopía Capítulo 7: Nuevas tendencias Conclusiones Bibliografía Anexos	LA MICROSCOPÍA: HERRAMIENTA PARA ESTUDIAR CÉLULAS Y TEJIDOS
	CAPÍTULO 5 EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO. 5.1.-Nociones elementales 5.2.-Técnicas de microscopía electrónica 5.2.1.-Diseño del microscopio electrónico de transmisión 5.2.2.-Diseño del microscopio electrónico de barrido 5.3.- Formación de la imagen en los microscopios electrónicos 5.4.-Poder de resolución: Aumentos 5.5.-Preparación de los especímenes. Contraste. Aplicaciones 5.5.1.-Microscopía electrónica de transmisión 5.5.2.-Microscopía electrónica de barrido 5.6.-Microfotografía electrónica: Interpretación de las imágenes Al observar y estudiar las microfotografías electrónicas se debe ser muy cuidadoso en la interpretación de las imágenes de la ultraestructura celular. Muchas interrogantes han persistido en la mente de los microscopistas, quienes han tratado de explicar y buscar respuestas a ellas. Durante muchos años se ha planteado la duda si en realidad lo que se observa en las micrografías electrónicas de transmisión corresponde a la realidad, o si por el contrario, es el aspecto de los elementos celulares modificados por las sustancias y métodos empleados en el procesamiento del tejido (artificios de técnica); o debidos a la muerte celular y sus efectos en el citoplasma, notablemente en los lisosomas. Estas dudas sobre los artificios de técnica han podido disiparse (en parte) mediante el uso de controles negativos y al comparar entre sí las micrografías de microscopía de luz, electrónica de transmisión y de barrido. Con el empleo de técnicas más recientes como inmunofluorescencia y microscopía confocal muchas estructuras presentes en la célula han sido estudiadas, corroborando su aspecto morfológico observado previamente en las micrografías electrónicas. El contraste observado en las microfotografías electrónicas de transmisión depende de ciertas propiedades del espécimen, del sistema óptico del microscopio y de las condiciones de iluminación y reproducción fotográfica. Las regiones del espécimen que contienen metales pesados empleados en la obtención del preparado, aparecen como regiones oscuras (electron-densas) debido al poder que poseen los átomos del metal pesado en dispersar los electrones que inciden sobre la muestra. Las regiones del espécimen (por ejemplo cristales) que poseen una mayor densidad aparecerán más oscuras que las regiones vecinas amorfas (fig. 5-10). A mayor cantidad de metal depositado, mayor electrondensidad, lo cual permite un marcado contraste, el cual es revelado en una amplia gama que va desde el negro, pasando por los tonos de gris hasta llegar al blanco; esto último representa las zonas en las que no se depositó el metal. Variaciones en el espesor del espécimen afectan la interpretación debido a la superposición de elementos; a mayor espesor, mayor contraste, de allí que el espesor del corte debe ser mínimo (alrededor de 100 nanómetros). Los cortes son colocados en una rejilla (portaobjeto) de cobre revestida de una película plástica y este material puede incrementar la granulosidad en la imagen y puede interferir seriamente con el contraste de la microfotografía (14). Las microfotografías electrónicas de barrido muestran una imagen 3D (tridimensional) del espécimen analizado. En la micrografía las zonas más oscuras corresponden a los planos más profundos y las zonas más claras a los planos más superficiales del espécimen, a partir de los cuales se originó una mayor cantidad de electrones secundarios. Al componerse la imagen de zonas claras y oscuras se puede apreciar el relieve y las depresiones, que en conjunto, conformarán el aspecto tridimensional (fig. 5-11). Figura 5-10.- Microfotografía electrónica de una mitocondria al Microscopio electrónico de transmisión. Las zonas más oscuras son denominadas electron-densas y las zonas claras son denominadas electron-lúcidas. Nótese la variada electrondensidad, la cual depende del grado de afinidad de las estructuras por los metales empleados para el contraste. Aumento 60.000x. Tomada de Raisman, J., González A. Hipertextos en el área de biología. Microscopía electrónica (94). Figura 5-11.- Microfotografía electrónica de un glomérulo renal al Microscopio electrónico de barrido. La imagen obtenida se observa en tres dimensiones, donde la profundidad de campo permite visualizar los diversos relieves. Aumento 1.200x. Tomada de Raisman, J., González A. Hipertextos en el área de biología. Microscopía electrónica (94). 5.7.-Semejanzas y diferencias entre la microscopía electrónica y la microscopia de luz

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