Capítulo 1:
Limitaciones para el estudio de células y tejidos
Capítulo 2:
Nociones básicas de óptica
Capítulo 3:
La imagen. Sistemas ópticos
Capítulo 4:
El microscopio compuesto
Capítulo 5:
El microscopio electrónico
Capítulo
6:
Técnicas especiales de microscopía
LA MICROSCOPÍA:
HERRAMIENTA PARA ESTUDIAR CÉLULAS Y TEJIDOS
CAPÍTULO
5
EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO.
5.1.-Nociones elementales
5.2.-Técnicas de microscopía electrónica
5.2.1.-Diseño del microscopio electrónico de transmisión
5.2.2.-Diseño del microscopio electrónico de barrido
5.3.- Formación de la imagen en los microscopios electrónicos
5.4.-Poder de resolución: Aumentos
El poder de resolución está determinado en parte por la longitud de onda de la radiación empleada para iluminar el espécimen y es inversamente proporcional a la misma, es decir, a menor longitud de onda, mayor poder de resolución. El haz de electrones puede tener longitudes de onda variables, las cuales influyen en el límite de resolución que a su vez dependerá del voltaje empleado para acelerar los electrones (tabla 5-1).
| Voltaje
de Aceleración (kV) |
Longitud
de onda (Å) |
Limite
de resolución teórico (Å) |
10 |
0.122
(0.122nm) |
3.7
(0.37nm) |
20 |
0.086
(0.0086nm) |
2.9
(0.29nm) |
50 |
0.054
(0.0054nm) |
2.1
(0.21nm) |
100 |
0.037
(0.0037nm) |
1.7
(0.17nm) |
200 |
0.025
(0.0025nm) |
1.3
(0.13nm) |
500 |
0.014
(0.0014nm) |
0.9
(0.9nm) |
1000 |
0.009
(0.0009nm) |
0.7
(0.07nm) |
Tabla 5-1.-Relación del voltaje de aceleración, la longitud de onda del haz de electrones y el poder de resolución en el microscopio electrónico de transmisión expresadas en kilovoltios (kV), angstroms (Å) y nanómetros (nm). Modificado de Sjöstrand F. (1967). Electron Microscopy of Cells and Tissues. Vol. 1, Instrumentation and Techniques (14).
Con el microscopio electrónico se puede alcanzar una resolución de aproximadamente 40.000 veces más que el poder de resolución del microscopio de luz y 2 x 106 veces el poder de resolución del ojo humano.
5.4.1.-Aumentos
en el microscopio electrónico
En el microscopio fotónico para obtener imágenes a mayores aumentos, simplemente se cambia el objetivo. En el microscopio electrónico esto no es posible y el aumento se obtiene modificando el haz de electrones y el voltaje de la lente proyectora, puesto que el aumento de la lente objetivo es fijo. Por ejemplo, para observar a mayores aumentos es necesario utilizar una mayor e intensa radiación de electrones y modificar la distancia focal de la lente proyectora, pero disminuyendo a su vez el diámetro del haz, con un tiempo de exposición del espécimen sumamente corto. Al intensificar el haz de electrones se incrementa también la temperatura y se puede quemar la muestra que se observa. Al aumentar la potencia del haz se reduce el tamaño del área que se observa y el campo visual representa áreas muy diminutas en el objeto. Para un aumento de aproximadamente 80.000x, el diámetro del área del campo visual es menor a un micrón (1µm). Esta área diminuta que se observa ocupará todo el diámetro de la pantalla de observación o de la placa fotográfica. De manera inversa, para observar a menores aumentos, el haz de electrones posee un mayor diámetro y el área de observación a su vez también es mayor; en consecuencia, a mayor diámetro del haz de electrones, menor aumento y a menor diámetro del haz, mayor aumento (14).
5.5.-Preparación de los especímenes. Contraste. Aplicaciones
5.5.1.-Microscopía electrónica de transmisión
5.5.2.-Microscopía electrónica de barrido
5.6.-Microfotografía electrónica: Interpretación de las imágenes
5.7.-Semejanzas y diferencias entre la microscopía electrónica y la microscopia de luz